Hinweise auf natürliche Selektion im Mitochondrium

Jul 17, 2023

Scientific Reports Band 13, Artikelnummer: 14110 (2023) Diesen Artikel zitieren

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Von Mitochondrien abgeleitete Peptide werden von mitochondrialer DNA kodiert, weisen jedoch außerhalb der Mitochondrien biologische Aktivität auf. Acht davon werden durch Sequenzen innerhalb der mitochondrialen ribosomalen 12S- und 16S-Gene kodiert: Humanin, MOTS-c und die sechs SHLP-Peptide, SHLP1-SHLP6. Diese Peptide haben verschiedene Wirkungen in Zellkulturen und Tiermodellen und beeinflussen die Neuroprotektion, die Insulinsensitivität und die Apoptose. Einige werden sezerniert und haben möglicherweise eine extrazelluläre Signalfunktion. Mit Ausnahme von Humanin ist ihre Bedeutung für die normale Zellfunktion jedoch unbekannt. Um ihre Bedeutung abzuschätzen, wurden ihre kodierenden Sequenzen bei Wirbeltieren auf synonyme Codon-Bias analysiert. Da sie in RNA-Genen liegen, sollte eine solche Verzerrung nur dann auftreten, wenn ihre Aminosäuren zur Aufrechterhaltung der biologischen Funktion konserviert wurden. Humanin und SHLP6 zeigen eine starke synonyme Codon-Verzerrung und Sequenzkonservierung. Im Gegensatz dazu zeigen SHLP1, SHLP2, SHLP3 und SHLP5 keine signifikante Verzerrung und sind schlecht konserviert. MOTS-c und SHLP4 weisen ebenfalls keine signifikante Voreingenommenheit auf, enthalten jedoch hochkonservierte N-terminale Regionen, und ihre biologische Bedeutung kann nicht ausgeschlossen werden. Vor SHLP2 wurde eine zusätzliche potenziell aus Mitochondrien stammende Peptidsequenz namens SHLP2b entdeckt, die ebenfalls eine hochkonservierte N-terminale Region mit synonymem Codon-Bias enthält.

In diesem Artikel bewerten wir die Vorstellung, dass Peptide, die durch kurze offene Leserahmen (ORFs) kodiert werden, notwendigerweise wichtige biologische Funktionen haben1. Insbesondere konzentrieren wir uns auf die mitochondrialen Peptide (MDPs), von denen Humanin das bekannteste ist. Als Humanin vor über zwanzig Jahren entdeckt wurde, war es das erste seiner Art, ein Peptid, das von mitochondrialer DNA kodiert wird, aber biologische Aktivität außerhalb des Mitochondriums aufweist. Es wurde bei einem Screening auf neuroprotektive Peptide mithilfe einer cDNA-Bibliothek gefunden, die aus den überlebenden Neuronen eines Alzheimer-Patienten erstellt wurde2. Zuvor ging man davon aus, dass das mitochondriale Genom nur 13 Proteine ​​kodiert, die alle in den Mitochondrien verbleiben. Es wurde jedoch festgestellt, dass Humanin die Apoptose hemmt und mit den Pro-Apoptose-Proteinen BAX, BIM, BID und IGFBP-3 im Zytosol der Zelle interagiert5,6,7,8. Darüber hinaus wurde sekretiertes Humanin im Zellkulturmedium nachgewiesen und es wurde festgestellt, dass extrazelluläres Humanin mit den Zelloberflächenrezeptorproteinen FPRL-1 und CNTFR/WSX-1/gp130 interagiert, die am Stoffwechsel und der Entzündungssignalisierung beteiligt sind2,9,10. Interessanterweise kann seine anti-apoptotische Eigenschaft möglicherweise auch schädlich sein, da die Hemmung des Zelltods ab einem bestimmten Schwellenwert das Tumorwachstum bei Krebs fördern kann11,12,13.

Humanin ist in anderer Hinsicht einzigartig; Es wird von einem verschachtelten, überlappenden Gen innerhalb eines RNA-Gens kodiert. Die für Humanin kodierende Sequenz liegt in MT-RNR2, dem Gen für die 16S-Untereinheit des mitochondrialen Ribosoms. Bei jüngsten Untersuchungen der mitochondrialen 16S- und 12S-RNA-Gene wurden sieben weitere MDPs mit potenzieller biologischer Aktivität identifiziert. Dies sind die sechs SHLPs (Small Humanin-Like Peptides), SHLP1-SHLP6, die in MT-RNR2 zu finden sind, und MOTS-c (Mitochondrial Open-reading-frame of the Twelve S rRNA type-c), innerhalb des mitochondrialen 12S-RNA-Gens MT-RNR114,15. Ein Diagramm, das die Positionen ihrer ORFs innerhalb der 16S- und 12S-RNA-Gene zeigt, ist in Abb. 1 dargestellt. Es wurden mehrere potenzielle biologische Aktivitäten für die SHLP-Peptide beobachtet, einschließlich der Verbesserung des Zellüberlebens durch SHLP2 und SHLP3, der Zellproliferation durch SHLP4 und Induktion der Apoptose durch SHLP614. Die MOTS-c-Produktion wird durch körperliche Betätigung gesteigert, und die Behandlung mit exogenen Peptiden bringt in Zell- und Tiermodellen viele der gleichen Vorteile wie körperliche Betätigung, einschließlich einer Verbesserung der Insulinsensitivität15,16.

Lage von MDPs in mtDNA. Die Positionen der MDP-kodierenden Sequenzen in den 16S- und 12S-RNA-Genen (grün) sind angegeben, wobei die Zahlen die SHLP-Peptide SHLP1-SHLP6 sowie Humanin (HN) und MOTS-c angeben. Die Pfeile zeigen die Kodierung durch den mtDNA-H-Strang (nach links zeigend) oder L-Strang (nach rechts zeigend) an. Unten ist zum Vergleich ein Diagramm der vollständigen zirkulären mtDNA dargestellt. Die tRNA-Sequenzen sind hellgrün, der D-Loop rot und die Proteingene in Blau- und Lilatönen.

Um zu zeigen, dass ein Peptid biologisch wichtig ist, kann man zeigen, dass eine Verringerung seiner Menge zu Funktionsstörungen in der Zelle führt. Während es derzeit keine Möglichkeit gibt, mitochondriale ORFs auszuschalten, können sie mit siRNA (small interfering RNA) ausgeschaltet werden. Dies wurde für Humanin durchgeführt, wo Knockdown seine antiapoptotischen und neuroprotektiven Wirkungen reduzierte5,17. Für die anderen MDPs liegen jedoch keine derartigen Ergebnisse vor. Man kann die Bedeutung eines Peptids auch mit einem einfacheren Test zeigen, der auf der Evolution beruht. Durch natürliche Selektion bleiben die für die Funktion des Peptids wichtigen Aminosäuren erhalten, sodass man auf eine Sequenzkonservierung über alle Spezies hinweg achten kann. Da die kodierenden Sequenzen der MDPs in ribosomalen Genen liegen, reicht die Sequenzkonservierung allein leider nicht aus, da sie stattdessen die Bedeutung der entsprechenden RNA-Basen für die Ribosomenfunktion widerspiegeln könnte. Ein komplementärer Ansatz besteht darin, in den peptidkodierenden Sequenzen nach synonymen Codons zu suchen. Ebenso wie die Erhaltung der Aminosäuresequenz ist auch der Synonym-Codon-Bias ein Beweis für eine reinigende oder negative natürliche Selektion, die im Laufe der Evolution nicht-synonyme Aminosäuremutationen „aussortiert“ hat. Andererseits sollte es für nicht-peptidkodierende Regionen der RNA-Gene keine Verzerrung geben. Daher untersuchen wir in dieser Studie nicht nur die Sequenzkonservierung, sondern auch die synonyme Codon-Verzerrung in den MDP-Kodierungssequenzen. Auf diese Weise bestimmen wir nicht nur, welche MDPs durch die Evolution konserviert wurden, sondern identifizieren auch gemeinsame Merkmale, die Hinweise auf ihre biologischen Rollen geben.

Abbildung 2 zeigt die Konsensus-Basen- und Aminosäuresequenzlogos für die Humanin-Alignments von Primaten, Säugetieren und Wirbeltieren mit den entsprechenden fsyn-Werten unten. Aminosäurepositionen mit fsyn ≥ 0,5, d. h. mit gleichen oder mehr synonymen Mutationen als nicht-synonymen Mutationen, werden hervorgehoben. Weitere Einzelheiten zur Anzahl der Mutationen und zur Sequenzkonservierung finden Sie in der ergänzenden Abbildung S1. Abbildung 2 und die folgenden Abbildungen zeigen die Ergebnisse unter Verwendung des Standard-DNA-Codes. Ergebnisse unter Verwendung des mitochondrialen DNA-Codes von Wirbeltieren sind ebenfalls in Abbildung S1 enthalten. Der einzige große Unterschied besteht darin, dass das Codon in Position 22 zu einem Stoppcodon wird, was ein Peptid mit 21 Aminosäuren anstelle von 24 ergibt. Ein merkwürdiges Merkmal der Humanin-Sequenzen ist dies Das Startcodon Methionin ist nicht besonders gut konserviert. Mutationen des Startcodons kommen in allen Vertebratenzweigen vor, mit einer Gesamterhaltungsrate von 79 %, die von 96 % bei Vögeln bis zu 46 % bei Reptilien reicht. Das Stoppcodon an Position 25 ist mit einer Gesamtkonservierung von 58 % noch weniger gut konserviert.

Synonym für Codon-Bias in Humanin. (A) Humanin-Sequenz beim Menschen. Sequenzlogos der Basen- und Aminosäuresequenz-Alignments mit dem synonymen Codon-Bias fsyn unten in (B) Primaten (Anzahl der Arten = 252), (C) Säugetieren (Anzahl der Arten = 148) und (D) Wirbeltieren (Anzahl der). Arten = 359). Die Buchstabenhöhen der Basen und Aminosäuren geben an, wie konserviert sie zwischen den Arten sind. Invariante Basen und Aminosäuren mit invarianten Codons sind mit Sternchen gekennzeichnet. Das „X“-Symbol steht für Stop-Codon. Werte von fsyn ≥ 0,5 werden rot hervorgehoben. Da Methionin im Standard-DNA-Code nur ein Codon hat, hat es keinen fsyn-Wert. Der Farbcode für die Aminosäuren ist hydrophob (schwarz), sauer (rot), basisch (blau) und neutral hydrophil (grün für glycin- und hydroxylhaltige Reste und magenta für amidhaltige).

Die Ergebnisse für Wirbeltiere zeigen zwei Regionen mit hochkonservierten oder invarianten Basen, entsprechend den Codons für C8, L9 und E15, I16. Diese Konservierung könnte darauf zurückzuführen sein, dass diese Basen für die Ribosomenfunktion von entscheidender Bedeutung sind, oder dass die entsprechenden Aminosäuren für die Funktion von Humaninen von entscheidender Bedeutung sind, oder auf eine Kombination aus beidem. Andererseits gibt es hochkonservierte Aminosäuren mit hohen fsyn-Werten in Regionen mit weniger gut konservierten Basensequenzen, A2, L10, D17, L18 und V20, was darauf hindeutet, dass diese Aminosäuren zwar für die Humaninfunktion wichtig sind, die entsprechenden Basen jedoch wichtig sind weniger wichtig für die Ribosomenfunktion. Die C-terminale Region weist bei Säugetieren hochkonservierte Reste auf, weist jedoch bei Nicht-Säugetieren eine größere Variation auf. Besonders interessant ist Position 22, bei der es sich bei Säugetieren fast immer um Arginin handelt, bei Nichtsäugetieren jedoch normalerweise um Lysin, was darauf hindeutet, dass eine positive Ladung an dieser Position für die Funktion oder Verarbeitung von Humanin wichtig ist. Einige Aminosäuren haben hohe fsyn-Werte bei Primaten, F6 und R23, aber nicht bei anderen Wirbeltieren, und umgekehrt, G5 und D17. Dies könnte auf eine Spezialisierung der Funktion zurückzuführen sein, an der die Reste beteiligt sind, die in einem Zweig der Wirbeltiere vorhanden sind, in anderen jedoch fehlen, oder die hohen fsyn-Werte könnten auf Zufall zurückzuführen sein. Die Wahrscheinlichkeit, dass ein fsyn > 0,5 zufällig auftritt, wird empirisch auf einen Bereich von 0,035–0,065 geschätzt, wie in einem späteren Abschnitt beschrieben, der die statistische Signifikanz der MDP-Analysen untersucht (siehe Statistische Analyse).

Abbildung 3 zeigt die Konsensus-Basen- und Aminosäuresequenzlogos für die MOTS-c-Alignments von Primaten, Säugetieren und Wirbeltieren mit den entsprechenden fsyn-Werten unten. Weitere Einzelheiten zur Anzahl der Mutationen, zur Sequenzkonservierung und zu Unterschieden bei der Verwendung des mitochondrialen DNA-Codes von Wirbeltieren sind in der ergänzenden Abbildung S2 aufgeführt. Das auffälligste Merkmal der MOTS-c-Alignments ist das hochkonservierte Pentapeptid MGYIF in der Mitte der Sequenz. Die N-terminale Region zeigt nur eine mäßige Sequenzkonservierung und die C-terminale Region sogar noch weniger. Im Gegensatz zu Humanin sind fast alle fsyn-Werte klein, mit Ausnahme von G7 im Alignment für Säugetiere. Daher liefert MOTS-c in voller Länge keine zwingenden Beweise für die natürliche Selektion bei Wirbeltieren. Angesichts der sehr hohen Konservierung des MGYIF-Pentapeptids mit seinem hohen fsyn-Wert für G7 bei Säugetieren ist es jedoch möglich, dass das Pentapeptid zumindest bei Säugetieren biologisch wichtig ist.

Synonymer Codon-Bias in MOTS-c. (A) MOTS-c-Sequenz beim Menschen. Sequenzlogos der Basen- und Aminosäuresequenz-Alignments mit dem synonymen Codon-Bias fsyn unten in (B) Primaten (Anzahl der Arten = 254), (C) Säugetieren (Anzahl der Arten = 178) und (D) Wirbeltieren (Anzahl der). Arten = 348). Die Buchstabenhöhen der Basen und Aminosäuren geben an, wie konserviert sie zwischen den Arten sind. Invariante Basen und Aminosäuren mit invarianten Codons sind mit Sternchen gekennzeichnet. Das „X“-Symbol steht für Stop-Codon. Werte von fsyn ≥ 0,5 werden rot hervorgehoben. Da Methionin und Tryptophan nur ein Codon im Standard-DNA-Code haben, haben sie keine fsyn-Werte. Der Farbcode für die Aminosäuren ist hydrophob (schwarz), sauer (rot), basisch (blau) und neutral hydrophil (grün für glycin- und hydroxylhaltige Reste und magenta für amidhaltige).

Abbildung 4 zeigt die Konsensus-Basen- und Aminosäuresequenz-Logos für Primaten für die SHLP1-, SHLP3- und SHLP5-Peptide mit den entsprechenden fsyn-Werten unten. Weitere Einzelheiten zur Anzahl der Mutationen, zur Sequenzkonservierung und zu Unterschieden bei der Verwendung des mitochondrialen DNA-Codes von Wirbeltieren sind in der ergänzenden Abbildung S3 aufgeführt. Keines dieser SHLP-Peptide weist überzeugende Beweise für eine natürliche Selektion bei Primaten auf. Die hervorgehobenen Positionen mit hohen fsyn-Werten, einer pro Peptid, könnten leicht zufällig sein. Darüber hinaus sind ihre Startcodons schlecht konserviert, 33 % bei SHLP1, 18 % bei SHLP3 und 30 % bei SHLP5, was ein weiteres Argument gegen eine wichtige biologische Rolle dieser Peptide spricht. Um zu bestätigen, dass SHLP1, SHLP3 und SHLP5 in Wirbeltieren nicht konserviert sind, wurden die menschlichen Sequenzen mit 19 Nicht-Primaten-Wirbeltierarten abgeglichen (Ergänzungstabelle S37), was wiederum eine schlechte Sequenzkonservierung zeigte, insbesondere im Hinblick auf die Startcodons. Aus diesem Grund wurden keine vollständigen Analysen mit Mehrfachsequenz-Alignments von Säugetieren und Wirbeltieren durchgeführt. Außerdem sollte beachtet werden, dass die schlechte Konservierung der SHLP3-Basensequenz etwas irreführend ist; Es enthält zwei Regionen mit Insertionen/Deletionen unterschiedlicher Länge, und wenn die Ausrichtung Lücken zulässt, verbessert sich die Erhaltung der Basensequenz dramatisch.

Synonymer Codon-Bias in SHLP1, SHLP3 und SHLP5. (A) Die menschliche SHLP1-Sequenz oben, die entsprechenden Sequenzlogos der Basen- und Aminosäuresequenz-Alignments und die synonymen Codon-Bias-fsyn-Werte unten bei Primaten (Anzahl der Arten = 217). (B) Die menschliche SHLP3-Sequenz oben, die entsprechenden Sequenzlogos der Basen- und Aminosäuresequenz-Alignments und die synonymen Codon-Bias-fsyn-Werte unten bei Primaten (Anzahl der Arten = 221). (C) Die menschliche SHLP5-Sequenz oben, die entsprechenden Sequenzlogos der Basen- und Aminosäuresequenz-Alignments und die synonymen Codon-Bias-fsyn-Werte unten bei Primaten (Anzahl der Arten = 216). Die Buchstabenhöhen der Basen und Aminosäuren geben an, wie konserviert sie zwischen den Arten sind. Invariante Basen und Aminosäuren mit invarianten Codons sind mit Sternchen gekennzeichnet. Das „X“-Symbol steht für Stop-Codon. Werte von fsyn ≥ 0,5 werden rot hervorgehoben. Da Methionin und Tryptophan nur ein Codon im Standard-DNA-Code haben, haben sie keine fsyn-Werte. Der Farbcode für die Aminosäuren ist hydrophob (schwarz), sauer (rot), basisch (blau) und neutral hydrophil (grün für glycin- und hydroxylhaltige Reste und magenta für amidhaltige).

Die erste Analyse des SHLP2-Sequenz-Alignments ergab einen Cluster von Codons mit hohen fsyn-Werten vor SHLP2 im gleichen offenen Leserahmen. Dieser Cluster beginnt bei den meisten Primatenarten mit einem Standard-Methionin-ATG-Startcodon, und dieses neue, mutmaßliche Peptid trägt den Namen SHLP2b. Da sie sich überlappen, sind die Konsensus-Basen- und Aminosäuresequenz-Logos für SHLP2 und SHLP2b zusammen in Abb. 5 dargestellt, mit den entsprechenden fsyn-Werten unten. Weitere Einzelheiten zur Anzahl der Mutationen, zur Sequenzkonservierung und zu Unterschieden bei der Verwendung des mitochondrialen DNA-Codes von Wirbeltieren sind in der ergänzenden Abbildung S4 aufgeführt. Menschen haben das alternative Startcodon GTG am Anfang des mutmaßlichen SHLP2b-Peptids, ebenso wie die meisten Wirbeltiere, die keine Primaten sind18. Beim Menschen wäre das Stoppcodon für SHLP2b das gleiche wie für SHLP2, aber bei Primaten im Allgemeinen wäre das Stoppcodon häufiger an Position 24 in Abb. 5, was ein Peptid mit einer Länge von 23 Resten ergibt.

Synonymer Codon-Bias in SHLP2 und SHLP2b. (A) SHLP2b- (blaue Linie) und SHLP2-Sequenzen (grüne Linie) beim Menschen. Sequenzlogos der Basen- und Aminosäuresequenz-Alignments mit dem synonymen Codon-Bias fsyn unten in (B) Primaten (Anzahl der Arten = 219), (C) Säugetieren (Anzahl der Arten = 174) und (D) Wirbeltieren (Anzahl der). Arten = 369). Die Buchstabenhöhen der Basen und Aminosäuren geben an, wie konserviert sie zwischen den Arten sind. Invariante Basen sind mit Sternchen gekennzeichnet. Das „X“-Symbol steht für Stop-Codon. Werte von fsyn ≥ 0,5 werden rot hervorgehoben. Da Methionin im Standard-DNA-Code nur ein Codon hat, hat es keinen fsyn-Wert. Der Farbcode für die Aminosäuren ist hydrophob (schwarz), sauer (rot), basisch (blau) und neutral hydrophil (grün für glycin- und hydroxylhaltige Reste und magenta für amidhaltige).

Bei Primaten hat SHLP2 nur eine Aminosäure, in Position 29 in Abb. 5, mit einem fsyn-Wert größer als 0,5, aber zwei andere, in den Positionen 15 und 16, haben Werte nahe 0,5. Da die Wahl von 0,5 als fsyn-Schwelle eher willkürlich war, wurde SHLP2 auch auf Säugetier- und Wirbeltierebene analysiert; allerdings waren die fsyn-Werte sogar noch niedriger. Somit liefert SHLP2 keine zwingenden Beweise für eine reinigende Selektion. Im Gegensatz dazu bleibt der Cluster konservierter Codons mit hohem fsyn-Wert am Anfang von SHLP2b auch auf Wirbeltierebene bestehen, was darauf hindeutet, dass das mutmaßliche SHLP2b-Peptid biologisch wichtig sein könnte. Beachten Sie, dass SHLP2 wie SHLP3 eine Region mit Insertionen/Deletionen kurz nach dem Startcodon enthält, wodurch die Basensequenzkonservierung in der Abbildung irreführend niedrig erscheint.

Abbildung 6 zeigt die Konsensus-Basen- und Aminosäuresequenzlogos für die SHLP4-Alignments von Primaten, Säugetieren und Wirbeltieren mit den entsprechenden fsyn-Werten unten. Weitere Einzelheiten zur Anzahl der Mutationen, zur Sequenzkonservierung und zu Unterschieden bei der Verwendung des mitochondrialen DNA-Codes von Wirbeltieren sind in der ergänzenden Abbildung S5 aufgeführt. Bei Säugetieren, einschließlich Primaten, ist die N-terminale Region mit vielen invarianten Basen hoch konserviert und wird beispielsweise von Aminosäuren L2 und R11 mit hohen fsyn-Werten flankiert. Die Ergebnisse legen nahe, dass die N-terminale Region von SHLP4, Reste 1–12, bei Säugetieren möglicherweise einer reinigenden Selektion unterzogen wurde. Im Gegensatz dazu ist der Rest des Peptids schlechter konserviert. Die Alignments von SHLP4 weisen einen Bereich mit Insertionen/Deletionen in der Mitte der Sequenz auf, was für die schlechtere Sequenzkonservierung verantwortlich ist. Bei Wirbeltieren, die keine Säugetiere sind, ist das Startcodon nicht gut konserviert, aber M5 ist immer noch hoch konserviert, und fast alle Mutationen, die dafür auftreten, betreffen das alternative Startcodon GTG. Die Ergebnisse für alle Wirbeltiere sind nicht so überzeugend wie für Säugetiere allein, es kann jedoch nicht ausgeschlossen werden, dass die Reste 5–12 auch bei Nicht-Säugetieren einer natürlichen Selektion unterzogen wurden, wobei M5 als Startcodon diente.

Synonymer Codon-Bias in SHLP4. (A) SHLP4-Sequenz beim Menschen. Sequenzlogos der Basen- und Aminosäuresequenz-Alignments mit dem synonymen Codon-Bias fsyn unten in (B) Primaten (Anzahl der Arten = 215), (C) Säugetieren (Anzahl der Arten = 144) und (D) Wirbeltieren (Anzahl der). Arten = 339). Die Buchstabenhöhen der Basen und Aminosäuren geben an, wie konserviert sie zwischen den Arten sind. Invariante Basen und Aminosäuren mit invarianten Codons sind mit Sternchen gekennzeichnet. Das „X“-Symbol steht für Stop-Codon. Werte von fsyn ≥ 0,5 werden rot hervorgehoben. Da Methionin im Standard-DNA-Code nur ein Codon hat, hat es keinen fsyn-Wert. Der Farbcode für die Aminosäuren ist hydrophob (schwarz), sauer (rot), basisch (blau) und neutral hydrophil (grün für glycin- und hydroxylhaltige Reste und magenta für amidhaltige).

Abbildung 7 zeigt die Konsensus-Basen- und Aminosäuresequenzlogos für die SHLP6-Alignments von Primaten, Säugetieren und Wirbeltieren mit den entsprechenden fsyn-Werten unten. Weitere Einzelheiten zur Anzahl der Mutationen, zur Sequenzkonservierung und zu Unterschieden bei der Verwendung des mitochondrialen DNA-Codes von Wirbeltieren sind in der ergänzenden Abbildung S6 aufgeführt. SHLP6 hat die am höchsten konservierte Sequenz der hier vorgestellten MDPs und im Gegensatz zu den anderen MDPs ist auch sein Stoppcodon hochkonserviert. Darüber hinaus weist es mehrere Reste mit hohem fsyn-Wert auf, sodass die Ergebnisse darauf hindeuten, dass das SHLP6-Peptid einer reinigenden Selektion unterzogen wurde.

Synonymer Codon-Bias in SHLP6. (A) SHLP6-Sequenz beim Menschen. Sequenzlogos der Basen- und Aminosäuresequenz-Alignments mit dem synonymen Codon-Bias fsyn unten in (B) Primaten (Anzahl der Arten = 242), (C) Säugetieren (Anzahl der Arten = 147) und (D) Wirbeltieren (Anzahl der). Arten = 348). Die Buchstabenhöhen der Basen und Aminosäuren geben an, wie konserviert sie zwischen den Arten sind. Invariante Basen und Aminosäuren mit invarianten Codons sind mit Sternchen gekennzeichnet. Das „X“-Symbol steht für Stop-Codon. Werte von fsyn ≥ 0,5 werden rot hervorgehoben. Da Methionin im Standard-DNA-Code nur ein Codon hat, hat es keinen fsyn-Wert. Der Farbcode für die Aminosäuren ist hydrophob (schwarz), sauer (rot), basisch (blau) und neutral hydrophil (grün für glycin- und hydroxylhaltige Reste und magenta für amidhaltige).

Wie bereits erwähnt, kann es zufällig zu hohen fsyn-Werten kommen. Die Basissequenzen vor und nach den MDPs können verwendet werden, um eine empirische Schätzung der Basiswahrscheinlichkeit zu erhalten, dass fsyn ≥ 0,5 zufällig auftritt, da diese Regionen außerhalb der ORFs liegen. In den Sequenzvergleichen wurden 12–15 zusätzliche Basen vor dem Startcodon und nach dem Stoppcodon einbezogen, also 4–5 zusätzliche „Codons“ vor und nach jedem Peptid. Unter Verwendung aller MDPs (für SHLP2/SHLP2b werden nur die Basen vor SHLP2b und nach SHLP2 verwendet) ergeben sich 77 zusätzliche „Codons“, von denen fünf Werte fsyn ≥ 0,5 haben, was einer Wahrscheinlichkeitsschätzung von 0,065 entspricht. Dieser empirische Ansatz geht nicht von der Neutralität synonymer Mutationen aus, mit der Ausnahme, dass sie tendenziell häufiger in konservierten peptidcodierenden Regionen auftreten als in nicht-codierenden Regionen. Da SHLP1, SHLP3 und SHLP5 keine Hinweise auf natürliche Selektion zeigen, können sie als Konsistenzprüfung verwendet werden. Ihre Sequenz-Alignments haben jeweils nur eine Aminosäureposition mit fsyn ≥ 0,5. SHLP1 und SHLP5 sind 24 Aminosäuren lang und SHLP3 ist 38. Unter der Annahme, dass diese hohen fsyn-Werte zufällig sind, ergibt dies eine durchschnittliche Wahrscheinlichkeit von 0,035, was darauf hindeutet, dass die Wahrscheinlichkeit von 0,065, berechnet mit den Sequenzen vor und nach den MDPs, ein sein könnte überschätzen. Die zur Berechnung der beiden Basiswahrscheinlichkeitsschätzungen verwendeten Regionen bestehen aus 231 Basen vor und nach den MDPs-ORFs und 258 Basen von SHLP1, 3 und 5, also insgesamt 489 Basen. Die Länge des 16S-Gens beträgt 1558 Basen; Daher wurde eine beträchtliche Menge der RNA-Gene untersucht, um die Grundwahrscheinlichkeitsschätzungen zu erhalten. Eine unterschiedliche Basenkonservierung, das Vorhandensein von Insertionen/Deletionen und die Nähe zu ORFs könnten die Basiswahrscheinlichkeit beeinflussen und möglicherweise einen Teil der Differenz zwischen den beiden Basiswerten erklären.

Tabelle 1 zeigt die p-Werte für jedes Sequenzalignment unter Verwendung der Binomialverteilung (Gleichung 2) unter Verwendung der strengeren Basiswahrscheinlichkeit von 0,065. Mit anderen Worten: Durch die Verwendung der höheren Schätzung der Basiswahrscheinlichkeit müssen mehr Reste des MDP einen fsyn ≥ 0,5 aufweisen, um statistische Signifikanz zu erreichen. Nur Humanin und SHLP6 haben p-Werte von weniger als 0,05, dem üblichen Kriterium für die Einstufung von Ergebnissen als statistisch robust, obwohl SHLP4 nahe beieinander liegt. Beachten Sie, dass es sich bei den p-Werten möglicherweise auch um Überschätzungen handelt, da der Wert 0,065 eine Überschätzung der Grundwahrscheinlichkeit darstellen könnte.

Unsere Auswertung der synonymen Codon-Verzerrung hat ergeben, dass mindestens zwei MDPs, Humanin und SHLP6, Hinweise auf natürliche Selektion aufweisen, was darauf hindeutet, dass diese Peptide biologische Rollen spielen, die im Verlauf der Wirbeltierentwicklung wichtig waren. Für Humanin zeigt die synonyme Codon-Bias-Analyse bei Wirbeltieren starke Hinweise auf eine reinigende Selektion (p < 0,00063). Obwohl die Bedeutung von Humanin bereits durch Knockdown-Experimente5,17 nachgewiesen wurde, dient das Ergebnis hier mehr als nur einer Positivkontrolle. Beim Menschen gibt es 13 Humanin-Homologe im Kerngenom, von denen 10 nachweislich in verschiedenen menschlichen Geweben transkribiert werden19. Nukleare DNA-Sequenzen, die aus Mitochondrien stammen, werden Numts (NUclear sequence of MiTochondrial origin) genannt und sind weit verbreitet20. Daher könnte es hypothetisch sein, dass eine RNA-Interferenz mit den Kernversionen und nicht mitochondrialem Humanin zu Funktionsstörungen in den Knockdown-Experimenten führte. Dennoch legt das Ergebnis hier nahe, dass die mitochondriale Version von Humanin wichtig sein muss, da seine Peptidsequenz während der gesamten Wirbeltierentwicklung konserviert wurde. Die nuklearen Versionen könnten ebenfalls wichtig sein und erfordern weitere Untersuchungen, wie z. B. die Verwendung von CRISPR-Techniken zur Veränderung oder Ausschaltung der Numts, und Methoden zur Einführung von Basenveränderungen in mitochondrialen Genen sind in Sicht21.

SHLP6 zeigt auch einen synonymen Codon-Bias (p < 0,037 bei Wirbeltieren), der die Signifikanzschwelle von p < 0,05 erfüllt. Vielleicht spiegeln die Ergebnisse für SHLP4 (p < 0,085 bei Säugetieren) und SHLP2b (p < 0,19 bei Wirbeltieren) auch eine reinigende Selektion in ihren hochkonservierten N-terminalen Regionen wider, aber es gibt zu wenige Reste mit hohen fsyn-Werten, um statistisch darauf schließen zu können. Ebenso kann diese Analyse nicht ausschließen, dass das hochkonservierte MGYIF-Pentapeptid in MOTS-c einer reinigenden Selektion unterzogen wurde, um seine Sequenz zu bewahren, aber die Region ist zu kurz, da nur G7 bei Säugetieren einen hohen fsyn-Wert aufweist, um auf Signifikanz schließen zu können. Während diese Studie keine wirbellosen Arten umfasste, ergaben Untersuchungen ihrer mitochondrialen DNA Sequenzen, die zu Humanin, SHLP6 und den hochkonservierten Regionen von SHLP2b, SHLP4 und MOTS-c homolog sind; Daher scheinen MDPs nicht nur bei Wirbeltieren vorzukommen (ergänzende Abbildung S7).

Für die anderen MDPs: SHLP1, SHLP2, SHLP3 und SHLP5 zeigen die Analysen eine schlechte Sequenzkonservierung und keine Hinweise auf einen synonymen Codon-Bias. SHLP-Peptide wurden erstmals durch die Analyse des menschlichen mitochondrialen 16S-Gens MT-RNR2 für alle ORFs mit einer Länge von mindestens 20 Aminosäuren identifiziert. Es ist durchaus möglich, dass einige von ihnen zufällig entstanden sind und keinen biologisch wichtigen Peptiden entsprechen. Den Autoren sind keine Berichte bekannt, die biologische Aktivitäten für SHLP1 und SHLP5 belegen. In der sie beschreibenden Originalarbeit wurde gezeigt, dass SHLP2 und SHLP3 in zwei Zellmodellen, einem menschlichen und einem murinen Ursprungs, zytoprotektiv wirken. Seltsamerweise scheinen Mäuse (Mus musculus) keine Homologen von SHLP2 und SHLP3 zu haben (ergänzende Abbildung S8), daher scheint der zytoprotektive Effekt zumindest für das Mauszellmodell zufällig zu sein. Es ist auch möglich, dass SHLP1, SHLP2, SHLP3 und SHLP5 biologisch wichtig sind, aber sie sind in der menschlichen Evolution zu spät entstanden, als dass synonyme Codon-Analysen nützlich wären.

Eine frühere Analyse von MOTS-c-Sequenzen in 14 Arten (13 Säugetiere und 1 Fisch) ergab angeblich Hinweise auf eine „positive“ Selektion15. Positive Selektion bezieht sich typischerweise auf eine kürzlich eingeführte vorteilhafte Mutation, die eine Population erfasst, und es ist unklar, wie dies artenübergreifend interpretiert werden soll. Es wurde behauptet, dass vier Reste eine positive Selektion zeigen, Q4, E5, G7 und I9, und die Basensequenzen und die Codonzahlen für diese Reste für die 14 Arten werden hier erneut analysiert (ergänzende Abbildung S9). Die Basen für G7 sind invariant, wohingegen die von Q4 ziemlich variabel sind. Die zuvor gemeldeten Daten zeigten Verhältnisse von nicht-synonymen zu synonymen Mutationsraten, wobei größere Verhältnisse auf eine positive Selektion hinweisen. Da G7 jedoch invariant ist, sind beide Raten Null und es ist unklar, wie das gemeldete Verhältnis ermittelt wurde. Es ist möglich, dass es sich bei den Ergebnissen aufgrund der geringen Stichprobengröße um Artefakte handelt. Jedenfalls hat keiner der vier Reste in den 14 Arten synonyme Codons. Interessanterweise gibt es in G7 zwar synonyme Mutationen bei Faultieren (Ergänzungstabelle S10), aber in der früheren Analyse waren keine Faultiere enthalten.

Ein Merkmal, das Humanin und SHLP6 von den anderen MDPs des 16S-Gens MT-RNR2 unterscheidet, ist die Richtung ihrer Translation, wobei Humanin und SHLP6 durch den H-Strang der mtDNA kodiert werden und die anderen durch den L-Strang ( Abb. 1). MOTS-c wird auch vom H-Strang kodiert. Beide mtDNA-Stränge werden über fast ihre gesamte Länge polycistronisch in RNA transkribiert. Allerdings gibt es keine Gene, die von der L-Strang-Region komplementär zu den 16S- und 12S-ribosomalen Genen kodiert werden, und die Transkription des L-Strangs endet oft, bevor sie dort ankommt22. Dies bedeutet, dass die L-Strang-kodierten MDPs weniger transkribiert würden als die H-Strang-kodierten. MDP-RNA-Sequenzen, einschließlich Sequenzen mit 3'-polyadenylierten Schwänzen, wurden in Zell- und Plasmaproben unter Verwendung von Humanin-, MOTS-c- und SHLP6-Gensequenzsonden in Northern-Blot- und RT-PCR-Experimenten beobachtet14,19,23,24, aber keine derartigen Experimente Für die anderen SHLP-Peptide wurde bereits berichtet.

SHLP6 ist unter den MDPs insofern einzigartig, als sowohl sein Start- als auch sein Stoppcodon nahezu invariant sind. Über die relativ schlechte Konservierung des Startcodons von Humanin wurde bereits berichtet25 und wird hier mit nur 79 % Konservierung bei allen Wirbeltierarten bestätigt. Noch weniger konserviert sind die anderen MDP-Stoppcodons mit einer Konservierungsrate von 58 % für Humanin und nur 17 % für SHLP4, obwohl SHLP4 bei 71 % der Säugetiere ein früheres Stoppcodon an Position 23 aufweist. Das Arginin-Codon an Position 22 von Humanin ist ein Stop-Codon im mitochondrialen DNA-Code von Wirbeltieren und ist bei Säugetieren nahezu invariant mit einem fsyn-Wert von 0,86 für das Stop-Codon (ergänzende Abbildung S1). Dies deutet darauf hin, dass die reinigende Selektion möglicherweise das Stoppcodon konserviert, jedoch nur, wenn Humanin innerhalb der Mitochondrien translatiert wird. Tatsächlich wurde in einer Studie eine Kolokalisierung des Humanin-Peptids innerhalb der Mitochondrien in Synovialzellen von Patienten mit rheumatoider Arthritis beobachtet26, was im Einklang damit steht, dass Mitochondrien der Ort der Humanin-Expression sind; Es sind jedoch weitere Untersuchungen erforderlich, um festzustellen, ob dies unter nicht pathologischen Bedingungen und bei anderen Zelltypen zutrifft.

Andererseits ist Humanin auch außerhalb der Mitochondrien sowie extrazellulär lokalisiert und wirkt bekanntermaßen sowohl auf zytosolische als auch auf Zelloberflächenproteine5,6,7,9,10,27, sodass auch die zytosolische Translation eine Rolle spielt Wahrscheinlichkeit. Wenn Humanin im Zytosol translatiert wird, kann die Länge des resultierenden Peptids stark variieren; Beispielsweise hat menschliches Humanin 24 Reste, wohingegen Ratten-Humanin, auch bekannt als Rattin, 38 Reste hat. Interessanterweise ähneln die Humanin-Reste K21, R22 und R23, die in Säugetieren hochkonserviert sind, den dibasischen Spaltstellen, die für die Verarbeitung vieler sezernierter Substanzen wichtig sind Hormone28. Die SHLP4-Reste R10 und R11 am Ende ihrer hochkonservierten N-terminalen Region ähneln ebenfalls einer dibasischen Spaltstelle, ebenso wie die MOTS-c-Reste R13 und K14. Die posttranslationale proteolytische Verarbeitung könnte helfen zu erklären, warum MDP-Stoppcodons so variabel sind; Solange die Spaltungsstelle erhalten bleibt, kann die dahinter liegende Sequenz von geringer Bedeutung sein. Derzeit ist jedoch nicht bekannt, ob die proteolytische Verarbeitung für die biologische Funktion von MDP wichtig ist. Es ist auch nicht bekannt, ob MDPs überwiegend in Mitochondrien oder im Zytosol translatiert werden. Ein Argument für die zytosolische Translation ist die Tatsache, dass das zweite Codon von MOTS-c ein Stoppcodon im mitochondrialen DNA-Code ist, sodass MOTS-c in voller Länge im Zytosol translatiert werden muss15. Das konservierte Pentapeptid MGYIF, das an Position 6 von MOTS-c beginnt, verfügt jedoch über ein eigenes Startcodon, sodass es innerhalb der Mitochondrien translatiert werden könnte. Die Fragen der proteolytischen Verarbeitung und der mitochondrialen versus zytosolischen Translation von MDPs erfordern eindeutig weitere Untersuchungen.

Ein Problem hinsichtlich der synonymen Codon-Bias-Analyse besteht darin, dass von den 55 Resten mit fsyn ≥ 0,5 in den MDP-Sequenzen 15 Leucinreste sind. Leucin ist eine von drei Aminosäuren mit sechs Codons im Standard-DNA-Code, und es ist möglich, dass Leucin überrepräsentiert ist, da die Wahrscheinlichkeit größer ist, dass eine zufällige Mutation synonym ist. Andererseits hat Serin auch sechs Codons, aber nur einer der Reste mit fsyn ≥ 0,5 ist Serin, sodass der Effekt möglicherweise gering ist. Tatsächlich könnte der Grund für die höhere Anzahl an Leucinrückständen biologischer Natur sein; Die L9R- und L10D-Mutanten von Humanin können nicht aus Zellen abgesondert werden29, und möglicherweise könnten Leucinreste für andere MDPs ähnlich wichtig sein.

Diese gemeinsamen Merkmale, die variable Peptidlänge, mögliche dibasische Spaltstellen in Humanin, SHLP4 und MOTS-c sowie die hohe Leucinhäufigkeit in Humanin und SHLP4 stehen im Einklang mit der Verarbeitung und Sekretion dieser MDPs, was auf eine Rolle bei der interzellulären Signalübertragung schließen lässt. Tatsächlich wurden sowohl Humanin als auch MOTS-c bereits außerhalb von Zellen nachgewiesen2,15,29, obwohl es noch keine Berichte über SHLP4 gibt. Umgekehrt deutet das gut konservierte Stoppcodon von SHLP6 ohne offensichtliche dibasische Spaltungsstelle darauf hin, dass seine Rolle intrazellulär sein könnte. Interessanterweise verfügt Humanin bei der Translation in Mitochondrien auch über ein hochkonserviertes Stoppcodon, das die dibasische Spaltungsstelle ersetzt, was darauf hindeutet, dass Humanin eine doppelte Rolle spielen könnte: intrazellulär für das in Mitochondrien exprimierte Peptid und extrazellulär, wenn es zytosolisch exprimiert wird.

Die Suche nach MDPs konzentrierte sich auf längere Peptide, mindestens 20 Reste im Fall des mitochondrialen 16S-Gens, aber die hier präsentierten Ergebnisse deuten darauf hin, dass auch kürzere Peptide wichtig sein könnten, insbesondere wenn eine proteolytische Verarbeitung stattfindet. Insbesondere die N-terminalen Regionen von SHLP2b und SHLP4 sowie das MGYIF-Pentapeptid von MOTS-c sind hoch konserviert und enthalten Reste mit hohen fsyn-Werten, was darauf hindeutet, dass sie wichtige biologische Rollen spielen könnten. Es gibt viele biologisch wichtige kürzere Peptide, das Gonadotropin-Releasing-Hormon mit zehn Resten, Oxytocin mit neun und die Enkephaline mit fünf, um nur einige zu nennen. MDPs müssen nicht nur in RNA-Genen vorkommen, und die synonyme Codon-Bias-Analyse könnte ausgeweitet werden, um mögliche MDPs im gesamten mitochondrialen Genom zu identifizieren. Eine Analyse ergab, dass es über 80 ORFs geben könnte, die zu MDPs im mitochondrialen Genom führen30, und ein MDP außerhalb der ribosomalen Gene, SHMOOSE, wurde bereits identifiziert31 sowie zwei Mikroproteine, Gau und Mtaltnd43,4. Darüber hinaus kann die statistische Analyse durch die Analyse größerer Regionen des mitochondrialen Genoms, einschließlich mehr nicht-peptidkodierender Basensequenzen, verbessert werden.

Die zur Familie der MDPs gehörenden Peptide sind faszinierend und bieten ein neues Paradigma zur Regulierung der Zellsignalisierung, des Stoffwechsels, der Entzündung und des Zelltods aus dem mitochondrialen Genom heraus. Einige von ihnen, wie Humanin und MOTS-c, wurden ausführlicher als andere auf ihren Einfluss auf die oben genannten Zellfunktionen untersucht. Aufgrund ihrer berichteten positiven Wirkung werden Humanin und MOTS-c trotz der möglichen krebsfördernden Eigenschaften von Humanin bereits als Anti-Aging-Therapeutika und Leistungssteigerer beim Menschen vermarktet32. Dies unterstreicht die Notwendigkeit, die potenzielle Gültigkeit dieser Peptide auf Genomebene zu bewerten. Ein Ergebnis einer solchen Bewertung besteht darin, sicherzustellen, dass die Form des Peptids, auf das die Therapie abzielt, die relevante ist. Die hier vorgestellten Ergebnisse legen beispielsweise nahe, dass das MOTS-c-Peptid, wie es derzeit untersucht (und vermarktet) wird, möglicherweise nicht in seiner biologisch relevantesten Form vorliegt. Darüber hinaus trägt die Identifizierung der wichtigen und konservierten Reste zur Optimierung der therapeutischen Leistung dieser Peptide bei. Angesichts der hohen Geschwindigkeit, mit der diese Peptide für potenzielle Behandlungen von Krankheiten vor dem Hintergrund ihrer potenziell negativen Auswirkungen entwickelt werden, ist es nur klug, darauf zu drängen, dass sie einer strengen Prüfung durch die breitere wissenschaftliche Gemeinschaft unterzogen werden.

Sequenzabgleiche der für die MDPs kodierenden Basensequenzen wurden mithilfe von Nukleotid-BLAST zusammengestellt. Da die Sequenzen offenen Leserahmen entsprechen, enthalten die Alignments keine Insertionen oder Deletionen. Für die Primatenausrichtung wurden umfassende, wenn auch nicht erschöpfende Suchvorgänge aller Primatenarten durchgeführt. Für die Wirbeltier-Alignments waren die Sequenzen auf Arten beschränkt, deren Kerngenome ebenfalls sequenziert wurden, was zu einer mit den Primaten-Alignments vergleichbaren Artenzahl führte. Die resultierenden Wirbeltierkonstellationen bestanden zu etwa 10 % aus Primaten, zu 30 % aus anderen Säugetieren, zu 20 % aus anderen Landwirbeltieren und zu 40 % aus Fischen. Für die Säugetier-Alignments wurden Nicht-Säugetier-Sequenzen aus der Wirbeltierliste gelöscht. Für Arten mit mehr als einer Version der Sequenz, vermutlich aufgrund von Polymorphismen, wurde die häufigste Version verwendet. Für Arten, die eine Mutation einer ansonsten invarianten Base oder eine Frame-Shift-Insertion/Deletion aufwiesen, die zu einer Mutation ansonsten invarianter Aminosäuren führte, wurde die Suche erweitert, um alle weiteren Arten mit Mutationen an dieser Stelle einzubeziehen. Wenn an dieser Stelle keine andere Art mit einer Mutation gefunden wurde, wurde die Sequenz entfernt. Infolgedessen ist die Anzahl der Arten in den Anordnungen unterschiedlich und die spezifischen Zahlen sind in den Legenden der Abbildungen angegeben. Alle Sequenzvergleiche umfassten außerdem 12–15 Basen vor dem Startcodon und 12–15 Basen nach dem Stoppcodon, um einen Vergleich mit benachbarten, vermutlich nicht peptidkodierenden Regionen zu ermöglichen. Alle Sequenz-Alignments sind in den Zusatzinformationen enthalten (Ergänzungstabellen S1–S36).

Um den Anteil synonymer Mutationen, fsyn, für jede Aminosäureposition zu berechnen, wurde das häufigste Codon der Konsensus-Aminosäure als „Vorfahren“-Codon genommen und die Gesamtzahl der synonymen Mutationen dieses Codons, nsyn, durch geteilt die Gesamtzahl der Mutationen, synonym plus nicht-synonym, nnon, an dieser Position,

Ein Ergebnis von 0,0 bedeutet also, dass alle Mutationen nicht-synonym sind, 0,5 zeigt eine gleiche Anzahl synonymer und nicht-synonymer Mutationen an und 1,0 zeigt an, dass alle Mutationen für diese Position synonym sind. Zum Vergleich: Das Verhältnis der synonymen zu nicht-synonymen Raten, eine weitere übliche Methode, um synonyme Codon-Bias1 auszudrücken, reicht von 0 für alle nicht-synonymen Mutationen, 1 für eine gleiche Anzahl synonymer und nicht-synonymer Mutationen bis +\ (\infty \) für alle synonymen Mutationen.

Die einseitigen p-Werte für die Häufigkeit des Auftretens von fsyn ≥ 0,5 in jedem Sequenzalignment wurden mithilfe der Binomialverteilung berechnet.

Dabei ist X die Anzahl der Reste mit fsyn ≥ 0,5, n die Länge des Peptids und p die Zufallswahrscheinlichkeit von fsyn ≥ 0,5. Die Wahrscheinlichkeit p wurde unter Verwendung nicht-peptidkodierender Regionen der Wirbeltier-Sequenz-Alignments berechnet, mit Ausnahme von SHLP1, SHLP3 und SHLP5, wo die Primaten-Sequenz-Alignments verwendet wurden. Die Logo-Figuren der Konsenssequenz wurden mit Weblogo33 erstellt.

Alle während dieser Studie generierten oder analysierten Daten sind in diesem veröffentlichten Artikel und seinen ergänzenden Informationsdateien enthalten.

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Open-Access-Förderung durch die National Institutes of Health (NIH).

Labor für strukturelle Biophysik, Zentrum für Biochemie und Biophysik, NHLBI, NIH, 50 South Drive, Bethesda, MD, 20892, USA

James M. Gruschus, Daniel L. Morris und Nico Tjandra

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JMG, DLM und NT trugen zum Design der Studie bei. JMG führte die Analyse durch. JMG, DLM und NT trugen zur Manuskripterstellung bei.

Korrespondenz mit James M. Gruschus.

Die Autoren geben an, dass keine Interessenkonflikte bestehen.

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Nachdrucke und Genehmigungen

Gruschus, JM, Morris, DL & Tjandra, N. Hinweise auf natürliche Selektion in den aus Mitochondrien stammenden Peptiden Humanin und SHLP6. Sci Rep 13, 14110 (2023). https://doi.org/10.1038/s41598-023-41053-0

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Eingegangen: 08. Juni 2023

Angenommen: 21. August 2023

Veröffentlicht: 29. August 2023

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-023-41053-0

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